一、實驗?zāi)康?/span>

學(xué)習(xí)和掌握外源基因導(dǎo)入真核細(xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實驗材料。

二、實驗原理

上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程。

外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴(yán)、難度較大；病毒法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜、而且可能對于細(xì)胞有較大影響；所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。

利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法最重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。

上圖是本次實驗采用的脂質(zhì)體中陽離子組分的結(jié)構(gòu)的示意圖。

本次實驗采用的脂質(zhì)體是promega公司的TransFast脂質(zhì)體試劑，它是一種陽離子脂質(zhì)體和中性脂質(zhì)體的混合物，是對于本次實驗中采用的293T細(xì)胞優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑。

三、實驗材料與器材

1、材料

293T細(xì)胞

MyoD表達(dá)質(zhì)粒和EGFP表達(dá)質(zhì)粒

DMEM培養(yǎng)基

鏈霉素/青霉素（雙抗）

FCS（小牛血清）

PBS（磷酸鹽緩沖溶液）

胰酶/EDTA消化液

轉(zhuǎn)染試劑（TransFast